DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE LA HORMONA GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA

DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE LA HORMONA GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA

PRUEBA PARA LA DETECCIÓN DE LA HORMONA HCG EN PLACA

PRINCIPIO DEL MÉTODO:

La prueba de hcg-latex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa de la hCG en orina y suero humano. las partículas de latex recubiertas con anticuerpo monocional anti-hCG presentes en la muestra del paciente.

SIGNIFICADO CLÍNICO:

La hCG es una hormona secretada por la placenta de la mujer embarazada que aparece relativamente pronto en sangre y orina después de la implantación del embrión fecundado. Puede ser detectada en orina a partir del tercer día de la perdida del periodo menstrual y su concentración sigue aumentando hasta alcanzar niveles muy altos después de las 10 semanas de gestación.

REACTIVOS:

LATEX:  Suspención de partículas de latex cubiertas con Ac.  monocional anti hCG humana. Azida sódica 0.95 g/L.

CONTROL +: Orina humana con una concentración de hCG> 1600 U/L Azida sodica 0.95 g/L.

CONTROL -: Suero animal Azida sódica 0.95 g/L.

MATERIAL:

-AGITADOR

-PIPETA

-PLACA DE REACCIÓN (OBSCURA)

PROCEDIMIENTO:

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente
   
   . la sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 100uL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de lso controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Mezclar el reactivo de hCG- latex vigorosamente o con el agitador vortex antes de usar. Depositar una gota (50 uL) junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del circulo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m durante 2 minutos.

RESULTADO:

La muestra presento aglutinación: POSITIVA (+).

PRUEBA PARA LA DETECCIÓN DE LA HORMONA HCG EN TIRA

USO DE LA PRUEBA

Prueba en tira rápida y sensible por inmunoensayo para la determinación cualitativa de la hormona gonadotropina corionica humana (hCG) en orina o suero. 

RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

La hormona gonadotropina corionica (hCG) es una hormona glicoprotéica sintetizada por la placenta y detectable en sangre y orina de manera temprana después de la implantación de un óvulo fertilizado en el tejido corionico. Es la señal principal y el marcador especifico de que existe embarazo. El uso de Ac monoclonales en la sub-unidad Beta de hCG es un importante avance que proporciona la posibilidad de fabricar una nueva generación de inmunoensayos con especificidad consistente y alta sensitividad para detectar hCG.

MATERIALES

• Muestra de orina o suero.
• Tira HCG

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 

1.- Sumerja la tira en la muestra de orina o suero, asegurese que el nivel de la muestra este por debajo de la línea denominada (max).

2.- Coloque la tira en una superficie plana tan pronto la muestra absorbida empiece a correr en la membrana (4-8 segundos).

3.- Espere para llevar a cabo la interpretación de resultados.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Positivo.

Adicionalmente a la línea rosada-rojiza de la zona de control, y otra línea aparecerá en la zona del test. (2.5-3 min).

Negativo.

solo aparece una línea rosada-rojiza en la zona de control y nada en el test.

Invalido.

Si después de 90 seg no aparece líneas en la zona del test ni en la zona de control.

RESULTADOS. 

Positivo (- -)

 

CONCLUSIÓN:

Con esta practica se llego a la conclusión de que la hCG se encuentra presente ya que se le  realizo la prueba de embarazo, la hormona gonadatropina corionica humana es también llamada como "hormona del embarazo" ya que es un indicador que hay un embarazo, esta hormona se es producida por la placenta y por la hipófisis.

BIOMOLÉCULAS

Biología Contemporánea

PRACTICA N° 1

BIOMOLECULAS

INTRODUCCIÓN:

Entre los compuestos fundamentales de la materia viva de las células encontramos los carbohidratos, lipidos y proteínas; por esta razón los alimentos que consumen todos los heterotofos incluido el ser humano, deben contener necesariamente estas macromoleculas.

Mediante el uso de pruebas quimicas sencillas se pueden identificar en los alimentos la presencia de estas macromoleculas.

OBJETIVO:

El alumno distinguirá en forma practica que alimentos contienes carbohidratos u cuales proteínas y grasas.

MATERIALES:

• 10 tubos de ensaye                                                                              Reactivo de Fehing
• 1 gradilla                                                                                        Ácido clorhidrico al 50%
• 2 vasos de precipitados de 100 ml                                                Lugol (solución alcohólica de yodo
• 1 agitados
• 1 mechero de bunsen                                                                  Para proteínas: 
• 2 pinzas para tubo de ensaye                                                     Reactivo de Biuret
• 1 gotero                                                                                       Ácido nítrico concentrado
• 1 pliego de papel estraza                                                           Hidróxido de amonio concentrado

MUESTRA DE ALIMENTOS:

• Harinas (trigo)
• Frutas (manzana)
• Verduras (zanahoria)
• Carnes (hígado de pollo)
• Lácteos (queso)
• Semillas (haba)

los alimentos deben estar hervidos a excepción de las frutas.

PROCEDIMIENTO:

Reacciones para identificar carbohidratos

1.- Prueba de lugol ( se utiliza para identificar almidones)

• coloca una pequeña cantidad de la muestra en un tubo de ensayo
• agrega dos gotas de lugol
• observa el color que toma la muestra al reaccionar con el lugol
• repite la prueba por lo menos en 5 alimentos diferentes
• anota los resultados.

si la muestra contiene almidón, con el lugol adquiera una coloración azul oscuro (prueba positiva) si no tomara el color ámbar del reactivo (prueba negativa)

los residuos contienen almidones y yoduros que de acuerdo con las normas ecológicas ECOL se pueden verter directamente al desagüe.

REACCIONES PARA IDENTIFICAR PROTEINAS:

1.- Prueba de Biuret ( se utiliza para identificar proteínas y polipeptidos no menores de tres aminoácidos en solución o al estado solido).

• agregar 1 ml de reactivo de Biuret a una pequeña porción de muestra colocada en cada tubo de ensaye 
• observa la coloración que toma la muestra.
• anota los resultados
• repetir la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

si en la muestra hay proteínas se observara que la muestra toma una coloración violeta o morada (prueba positiva; si se queda de color azul , quiere decir que en la muestra no hay proteínas (prueba negativa)

los residuos contienen cobre, por lo que la parte liquida debe colocarse en un contenedor plástico para su tratamiento o almacenamiento temporal, hasta que pueda desecharse correctamente.

2.- REACCIÓN XANTOPROTEICA ( se utiliza para identificar proteínas que contienen aminoácidos aromativos).

a) agregar 1 ml de ácido nítrico concentrado a una pequeña porción de muestra colocada en un tubo de ensaye, calienta con precaución, sujetando el tubo con unas pinzas para tubo de ensaye y metiendo y sacando el tubo hacia donde no haya personas. puedes calentarlo en baño maría. Espera que enfrié.

b) deja resbalar por la paredes del tubo 1 ml de hidróxido de amonio ( no respires los vapores) sin agitar de tal forma que se formen en dos capas.

c) anota los resultados en el cuadro.

d) repite la prueba por lo menos 5 alimentos diferentes.

si en la muestra hay proteínas se formara un anillo de color naranja entre las capas formadas por el ácido y el hidróxido (prueba positiva).

los residuos contienen un ácido y una base por lo que mezcla con mucho cuidado las dos capas para que ambas soluciones (ácido y base ) se neutralicen y puedas desecharlas.

REACCIONES PARA IDENTIFICAR LIPIDOS:

1.- Reacción con Sudan lll(se basa en que este colorante es soluble en grasas e insolubles en agua)

a) colocar en los tubos pequeñas porciones de muestras, agregar a cada tubo 5 ,ml de agua de grifo.

c) agregar 3 gotas del reactivo Sudan lll 

d) agita enérgicamente y deja reposar por 5 minutos.

e) observa la formación de gotas de grasa coloreadas con Sudan lll de color naranja lo cual indica que el alimento contiene grasas ( prueba positiva)

f) anota los resultado en el cuadro.

g) repite la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

Manteniendo las condiciones adecuadas de manejo no cabe esperar problemas ecológicos, por lo que  las sustancias pueden desecharse por el desagüe.

1.-PRUEBA CON PAPEL ESTRAZA:

a) colocar pequeñas porciones de cada alimento en pedazos de papel de estraza.

b) dobla el papel sobre el alimento y presiona con los dedos .

c) observa si hay áreas del papel que se vean traslucidas y aparentemente húmedas lo cual indica que el alimento contiene grasas (prueba positiva).

d) anota los resultados en el cuadro

e) repite la prueba en por lo menos 5 alimentos diferentes.

RESULTADOS:

1.- Para anotar los resultados obtenidos en cada una de las pruebas se escribe +++ cuando el resultados de la prueba sea muy positivo( el color sea bien definido, lo cual indica alta concentración de la biomolecula buscada  ++ cuando el resultado de la prueba sea regularmente positivo. + para poco positivo y - para negativo (cuando no de el color esperado, lo indicara ausencia de la biomolecula.

ALIMENTO CARBOHIDRATOS                         PROTEÍNAS                                          LIPIDOS LUGOL BIURET                                       XANTOPTOEICA SUDAN ll                                              ESTRAZA TRIGO ++       -                                                    "+++"      +                                                               "+" MANZANA  +++  +++                                                   "+++"    -                                                                    - HÍGADO -    -                                                       "+++"   +++                                                              +++ HABAS  +++      +++                                                "+++"    ++                                                                  ++ QUESO -        -                                                      "+++"    +++                                                              +++ ZANAHORIA -       -                                                       "+++"     -                                                                   -

CONCLUSIÓN:

El objetivo de esta practica fue conocer que las biomoleculas forman una parte importante en la vida diaria y estas las encontramos en los diversos alimentos que consumimos dichos alimentos están constituidos por lipidos, carbohidratos, proteínas.