Recuento de Plaquetas

                                                                   Recuento de plaquetas 


Objetivo:

Que el alumno aprenda a contar correctamente las plaquetas.

Introducción:

Las plaquetas son los elementos formes mas pequeños de la sangre, actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, ademas de participar en el proceso de la coagulación sanguínea.

Las plaquetas son difíciles de contar debido a que son pequeñas y deben distinguirse de los restos celulares. otra fuente de dificultad reside ne en su tendencia de adherirse al cristal , a cualquier cuerpo extraño y en particular unas de otras.
Para el conteo de plaquetas se utiliza oxalato de amonio como diluyente y se cuentan en los mismos cuadros para glóbulos rojos y el resultado se multiplica por 1000.

Material y Reactivos

1. Pipeta de thoma para globulos blancos
2. Microscopio
3. Caja de Petri con papael filtro
4. Camara de Neubauer 
5. Oxalato de amonio al 1%
6. Sangre venosa con EDTA

Procedimiento 

1. Mezclar la sangre perfectamente.
2. Aspirar la muestra hasta la marca 0.5
3. Limpiar con una gasa el exceso de sangre y aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11.
4. Mezclar de 3 a 5 min. desechar las 3 primeras gotas y llenar las cuadriculas de la cámara de Neubauer.
5. Dejar sedimentar de 10 a 15 min. la cámara en una caja petri con un disco de papel filtro húmedo en el fondo para evitar la evaporación.
6. Enfocar la camara y contar las plaquetas en los mismos cuadros para globulos rojos empleando el objetivo 40 X.
7. La plaquetas contadas se multiplican por  1 000 para obtener el numero de plaquetas por mm.
8. Valor de referencia
   
   
   150 000  a 450 000 

"TINCION DE WRIGHT " RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

Recuento Diferencial de leucocitos

Introducción

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de sangre.
Al conocer la protección de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyetico podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Pare el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.
Hay varios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena y en linea.


Material y Reactivos

1.  Frotis sanguineo
2. Microscopio 
3. Aceite de inmersion 
4. Un contador de celulas

Procedimiento 

1. Se  coloca el frotis en el microscopio y  se enfoca.
2. Se le agrega una gota de aceite de inmersion y se observa con el objetivo de de 100 X
3. Si el recuento se hace en  linea de empieza en el borde de un frotis hasta el otro borde en la linea paralela hasta contar 100 leucocitos.
4. Se van contando los monucleares ( monositos y linfocitos ) y los polimorfonucleares ( neutofilos, eosinofilos y baofilos ) segun su morfologia.
5. Se reportan en % ( Valor relativo) o en valor absoluto ( mm3)

Valores de referencia

                                                      Adultos                                                     Niños 

Linfocitos                                     20-55 %                                                    20 - 50 %                           Monocitos                                    2 - 6 %                                                        0 - 9 %

Eosinofilos                                   1 - 5 %                                                        0 - 8 %

Basofilos                                       0 - 1%                                                        0 - 1 %

Neutrofilos                                   45 - 70 %                                                   20 - 60 %

Bandas                                           0 - 5 %                                                       1 - 6 %

CONTEO DE LEUCOCITOS

CONTEO DE LEUCOCITOS

Introducción

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematologia   diagnostica. Para contar los leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con el liquido de Turk, que es una solucion hipotonica que destruye a los eritrocitos y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer y se cuenta el numero de células en todos los cuadros indicados.

Material y reactivos

1.  Pipeta de thoma para glóbulos blancos.
2. Una cámara de Neubauer 
3. Un microscopio 
4. Solución de Turk
5. Gasas
6. Sangre venosa con EDTA

Procedimiento

1. Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente.
2. Aspirar sangre con la pipeta de thoma hasta la marca 0.5.
3. Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absarbente.
4. Aspirar liquido de Turk hasta la marca 11.
5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm.
6. Agitar la pipeta de thoma de 3 a 5 minutos y preparar la cámara con el cubrehematimetro.
7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematimetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.
8. Dejar reposar de 3 a 5 min. la cámara con la muestra.
9. Enfocar la cámara en 1 microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las cuatros cuadriculas de los extremos.
10. Multiplicar el numero de leucocitos contados por 50.

Valor de referencia

5000 a 10 000/ mm3 

Resultado 178 Leucocitos 

178 X 50 = 8 900 mm3

Practica Reticulocitos

Reticulocitos 

Objetivo

Que el alumno aprenda a identificar y cuantificar correctamente a los reticulocitos.

Introducción

Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes y contienen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red (de ahí su nombre)  mediante un colorante supravital.

Cuando en la médula osea aumenta la eritropoyesis, aumenta también el numero de reticulocitos que salen hacia la circulación.

Materia, Reactivo y Equipo 

• Sangre venosa con EDTA
• Colorante de azul de cresil brillante o nuevo azul de metileno
• Tubo de ensaye 
• Porta objetos 
• Pipetas pasteur tallo corto con bulbo
• Baño maría 
• Microscopio
• Aceite de inmersión 

Procedimiento 

1.- Mezclar la muestra sanguinea y en un tubo de ensaye colocar 5 gotas con una pipeta pasteur.

2.- Agregar 5 gotas de colorante con una pipeta pasteur y mezclar.

3.- incubar el tubo de ensaye a 37° C durante 15 minutos en el baño maría.

4.- Mezclar la suspensión y realizar un frotis en un porta objetos.

5.- Dejarlo secar a temperatura ambiente, agregarle una gota de aceite de inmersión y observar con el objetivo 100 X.

6.- Buscar celulas que presenten una red con colorante azul ( reticulocitos). Contar 1000 eritrocitos en diferentes partes del frotis e ir registrando el numero de reticulocitos observados.

Formula:

Resultado: Numero de reticulocitos observados X 100

                _________________________________

                Numero total de eritrocitos 

Valores obtenidos Muestra 1

Resultado: 1 X 100

               ________= 0.5 

                   200

Valores obtenidos Muestra 2 

Resultado: 4 X 100

                _______= 0.4

                  900

Valores de referencia

 Adultos:  0.5 - 20%

Recién Nacidos: 2.5 - 6.5 %

Conclusión:

A través de esta practica pudimos como se lleva acabo la practica y  observar los reticulocitos presentes en la sangre ademas de ver cuales son los valores de referencia en adultos y recién nacidos . 

Practica: Indices Eritrocitarios

Indices Eritrocitarios 

Propósito:

Para realizar esta practica es necesario obtener primero los valores de el conteo de eritrocitos, hemoglobina y hematocrito presentes en la sangre.

Materiales:

En este caso  se ocuparan todos los materiales necesarios que anteriormente se ocuparon para cada una de las practicas ya realizadas

Nota:

En esta practica solo se harán operaciones con los resultados obtenidos del Conteo de Eritrocitos, Hemoglobina y Hematocrito.

Formulas:

Valor Hematocrito% X 10

_____________________= V.C.C En M 3

N°  Eritrocitos / L               Valores Normales 

                                           82.92 M 3

Sustitución

44.3% X 10

___________= 9.4658 X10-5 

4,680,000 

Hemoglobina g/dl X 10

__________________= H.C.M en pg

N° de Eritrocitos / L      Valores Normales 

                                          29-32 pg

Sustitución

15.3 g/d X 10

___________= 3.2692 X10-5 

4.680,000

Hemoglobina g/d X 10

_________________= C.H.C.M En %

Valor Hematocrito%     Valores Normales

                                         32- 36 %

Sustitución:

15.3 g/d X 10

___________= 3.4537 

44.3%

Hematocrito

HEMATOCRITO 

Introducción

El hematocrito es el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguínea y se expresa en porcentaje.

La determinación de hematocrito es un método sencillo y confiable para detectar anemia o policitemia.

El hematocrito se puede determinar por dos métodos:

1.  Macrometodo (Wintrobe)
2. Micrometodo

Material:

• Tubo de wintrobe
• Tubo capilar 
• Plastilina
• Centrifuga
• Microcentrifuga
• Pipeta pasteur tallo largo
• Lector para hematocrito o regla

Técnica Macrometodo

1. Mezclar la muestra sanguinea suavemente y con una pipeta pasteur o canula llenar el tubo de wintrobe, colocando la punta de la pipeta hasta el fondo del tubo, la punta de la pipeta se va elevando pero permaneciendo por debajo del menisco de sangre para evitar la formación de burbujas o espuma. 

2.- El tubo se llena hasta la marca 100 con la muestra sanguinea y se ´pone a centrifugar durante 30 minutos a 3, 000 r.p.m.

3.- Se efectúa la lectura.

Técnica Micrometodo

Mezclar la muestra sanguínea adecuadamente y llenar un tubo capilar hasta 3/4 partes.

El extremo vació que no estuvo en contacto con la sangre se sella con plastilina o calor.



El tubo de la muestra sanguínea se coloca en la microcentrifuga a 10,000 r.p.m. durante 10 minutos.



Leer el porcentaje de hematocrito en el lector o medirlo con una regla.

Resultados:

Valores normales:

Hombres: 47.0  a 5.0

Mujeres: 42.0 a  5.0

Resultado Tubo de Wintrobe : 48 g/ dL
Resultado Tubo Capilar: 2.9 g/ dL

Hemoglobina

Hemoglobina 

Determinación cuantitativa de hemoglobina 

Principio del metodo

La hemoglobina es oxidada por la accion del ferriocianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina

la intensidad del color formado es proporcional a la concentracion de hemoglobina presente en la muestra.

Material

Sangre obtenida por punción venosa

Pipeta de thoma 

Tubos de ensaye 

Reactivos 

Estándar 

Blanco 

Dilución de la muestra 

Procedimiento:

1.- Aspirar con la pipeta de thoma de glóbulos blancos hasta la marca 0.5 

2.- Vertir la  sangre en el reactivo

3.- Colocar papel parafil  y mezclar 

4.- Meter la primer cubeta que es el el blanco para nivelar el espectofotometro debe estar nivelado a 100.

5.- En la segunda cubeta meter el estándar y hacer la lectura 

6.- En la tercer cubeta meter la muestra obtenida y realizar la lectura.

Obtener los cálculos necesarios y dar el resultado final. 

Cálculos:

( A ) Muestra
___________X 15 ( Conc. Patrón) = g/dL de hemoglobina en la muestra.

( A ) Patrón


 Valores de referencia:

Hombres: 14 - 18 g/ dl
Mujeres: 12 - 16 g/dl

Resultados:


Blanco= 100.0
Estándar = 0.340


Hombre
Muestra 1 = 0.392

__.392___x 15 = 17.29 g/dL
    .340


Mujer
Muestra 2 = 0.304

____.304____x 15 = 13.41 g/dL
        .340


 Conclusión

Dados los resultados obtenidos pude comprobar que los valores de las muestras están dentro del rango normal de la hemoglobina.

Ademas a través de esta practica se pudo saber los cálculos correctos para la determinación de la hemoglobina.