TÉCNICAS MACROSCÓPICAS COPROPARASITOSCOPICAS

Técnicas Macroscopicas Coproparasitoscopicas

Tamizado

Se fundamenta en el fenómeno de la filtración, utilizando tamices de diferentes diámetros en donde quedan atrapados los parásitos ( trematodos, cestodos, nematodos). Esta técnica permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados de los metazoarios.   

Material:

1 coladera

1 abatelenguas

1 caja petri

1 pinza

Procedimiento:

1.- Colocar pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con ayuda del abatelenguas.

2.- Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado lo mas limpio posible.

3.- Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera.

4.- Los parásitos encontrados colocarlos en una caja petri con solución salina.

5.- Se identifica la parte del parásito o el parásito completo 

6.- Se reporta el genero y la especie del parásito o parte del parásito.

Resultados

Macroscopicamente no se pudo observar ningún parásito a simple vista pero se observo microscopicamente algunos restos de almidón.

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

Método de concentración por flotación de Willis

 Introducción

Este método esta recomendado especialmente para la investigación de protozoarios y helmintos.consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.
Los huevos y quistes de peso especifico menos que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del liquido.

Material                                                            Reactivos      

• 1 Vaso de precipitados                          Solución saturada de NaCl
• 1 Embudo                                                Solución de Yodo- Lugol
• 1 Gasa 
• 1 Tubo de ensaye
• 1 Portaobjetos 
• 1 Cubreobjetos 

Procedimiento


1.- Tomar aproximadamente 1g de heces fecales con un abatelenguas 



2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitados y mezclar con 10 ml de solución saturada de cloruro de sodio. 

3.- En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa llenando completamente el tubo.

4.- Coloque un cubreobjetos sobre el tubo, de manera que el liquido haga contacto con  el cubre objetos.


5.- Esperar de 5 a 10 minutos.

6.- Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubre objetos que esta en contacto con la muestra.

7.- Colocaran una gota de  yodo lugol sobre un portaobjetos, retirar el cubreobjeto con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos. 

8.- Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40x, buscando quistes o huevecillos de parasitos.














Resultados 

Al observar la muestras en el microscopio encontramos lo siguiente:

Huevesillos de Ascaris lumbricoides 

Muestra 1

Quistes de Entamoeba coli

Muestra 2

Huevesillos de Ascaris lumbricoides

Quistes de Entamoeba coli 

TÉCNICA DE FAUST-BISS

TÉCNICA DE FAUST- BISS

Este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necátor 1.055. Tricocéfalo 1.150. Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso especifico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato de Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utilizada diluye y lava la metería fecal. El filtrado con gasa doblada evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

Propósito:

Distinguir el método que se siga atreves de la técnica de faust para obtener resultados acerca del examen realizado.

Materiales:

• Toma de muestra biológica
• Embudo de decantación
• Vaso de precipitado
• Aplicador de madera
• Abate lenguas
• Tubo de ensayo
• Gasa
• Gradilla
• Mechero de Bunsen

Sustancias:

• Agua Destilada                                           
• Yodo Lugol
• Sulfato de Zn

 Procedimiento:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

 Soluciones:

• Agua destilada
• Sulfato de Zn
• Yodo lugol

Procedimiento:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

 2. Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrífuga, ayudándose con un embudo pequeño.



3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.




4. Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.


5. repetir el procedimiento 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.
















6. Decantar nuevamente el liquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento . centrifugar  durante 1 min a 1500 rpm.

7. Tomar 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del liquido . Colocarlos en un porta objeto y mezclarla con 1-2 gotas de Lugol, colocar cubre- objetos.

8. Examinar al microscopio y reportar los resultados.

  Conclusiones:

Pude desarrollar  el método de Faust además de identificar los diferentes resultados que encontramos en la muestra. 

Resultados:

En la muestra de heces fecales encontramos lo siguiente:

• cristales 
• quistes 
• grasa 
• jabones 
• tejidos conectivos 
• celula de almidón

METODOS DE CONCENTRACION-FLOTACION DE FAUST

METODOS DE CONCENTRACION-FLOTACION DE FAUST

Este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos: Necátor 1.055. Tricocéfalo 1.150. Áscaris fértil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso especifico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato de Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utilizada diluye y lava la metería fecal. El filtrado con gasa doblada evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

Propósito:

Distinguir el método que se siga atreves de la técnica de faust para obtener resultados acerca del examen realizado.

Materiales:

• Toma de muestra biológica
• Embudo de decantación
• Vaso de precipitado
• Aplicador de madera
• Abate lenguas
• Tubo de ensayo
• Gasa
• Gradilla
• Mechero de Bunsen

Sustancias:

• Agua Destilada                                           
• Yodo Lugol
• Sulfato de Zn

 Procedimiento:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

 Soluciones:

• Agua destilada
• Sulfato de Zn
• Yodo lugol

Procedimiento:

1. Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.

 2. Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrífuga, ayudándose con un embudo pequeño.



3. Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.




4. Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.


5. repetir el procedimiento 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.
















6. Decantar nuevamente el liquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento . centrifugar  durante 1 min a 1500 rpm.

7. Tomar 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del liquido . Colocarlos en un porta objeto y mezclarla con 1-2 gotas de Lugol, colocar cubre- objetos.

8. Examinar al microscopio y reportar los resultados.

  Conclusiones:

Mi conclusión acerca de esta practica que realizamos es que aprendí a realizar   el método de concentración- Flotación de Faust además de identificar algunos componentes del método indicado para el diagnostico de huevos livianos de helmintos.

IDENTIFICA MICROORGANISMOS CON BASE EN TECNICAS PARASITOLOGICAS

IDENTIFICA MICROORGANISMOS  CON BASE EN TÉCNICAS PARASITOLOGICAS   

Examen Coproparasitoscópico en Fresco                                                                                 Practica 1 

Dr. Vicente Martinez Fragoso

I.- Introducción:

Como sabemos uno de los primeros microscopistas fue Anton Van Leewenhoek y a mediados del siglo XVII fue el primero en utilizar este método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoitos de Giardia lamblilia. 

El método que necesita menos equipo y el mas sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas  de heces frescas o no preservadas, los exámenes ordinarios se hacen con solución salina isotónica y lugol. 

El lugo se emplea principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas con base a sus características.

El examen de materia fecal directo o en fresco puede revelar o no parásitos, dependiendo de la intensidad de la información.   

II.- Fundamento:

La solución salina isotónica da las condiciones adecuadas para que la célula se mantenga viva. El medio ideal para todo tipo de parásito que pueda encontrarse en las muestras de heces, en cualquier etapa de su desarrollo, es la solución salina fisiológica, y el lugol en la practica ha demostrado su eficacia para la tincion e identificación de parásitos intestinales. 

III.- Objetivo:

 Nuestro objetivo de esta practica es saber que la técnica de este examen coproporasitoscopico  método en fresco es sencillo y rápido, ademas de la economía en su realización.

esta técnica es la mas útil para encontrar trofozoitos de amibas y flagelados.

IV.- Material:

• Muestra fecal
• Aplicadores de madera 
• Porta objetos  de 25 x 76mm
• Cubre objetos
• Solución salina 
•  Yodo Lugol Parasitologico

V.- Procedimiento

1. En un porta objetos colocar una gota de solución salina isotónica 
2. con la punta del aplicador tomar una pequeña muestra de aproximadamente 1 a 4 mg. de heces, en muestras con moco y sangre elegir esa parte para estudiar.
3. Mezclar, procurando hacer una suspencion en preparación delgada y no un frotis.
4. Quitar de la suspencion fibras y oros fragmentos grandes.
5. Colocar el cubreobjetos  lentamente procurando no dejar burbujas.
6. Examinar al microscopio en forma sistemática, objetivo  a seco débil y a seco fuerte.
7. Repetir el mismo procedimiento con una gota de yodo lugol en lugar de la de solución salina.

VI. Observaciones:

Al final de la practica pudimos obtener los siguientes resultados de las muestras vistas en el microscopio:

Muestra 1 (Con Yodo Lugol)

• Fibrias
• Almidón
• Bacilos

Muestra 2 (Con yodo Lugol)

• Fibras vegetales  

Muestra 2  (Con Solución Salina)

• Fibras Musculares digeridas y no digeridas

Muestra 1 (Con Solución Salina)

• Fibras transparentes 

Práctica:   Agar E.M.B. (Eosina y Azul de Metileno)

Función.

Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram Negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Propósito:

El fin que obtenemos al realizar esta  práctica es reconocer  las bacterias Gram Negativas que se alojan en el medio de cultivo.

Fundamento.

Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine. En el medio de cultivo, la peptona es la fuente nutritiva y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y también, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. El agar es el agente solidificante. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Permite el crecimiento de Candida como colonias rosadas y puntiformes. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Materiales

-          Mechero de Bunsen

-          Balanza

-          Espátula

-          Vidrio de reloj

-          Trípode

-          Tela de asbesto

-          Probeta

-          Pipeta

-          Matraz Erlenmeyer

-          Algodón

-          Olla exprés

          Gasas

-         Agitador

Sustancias

-          Agar eosina y azul de metileno

-          Agua purificada

Procedimiento

1.- Pesar el vidrio de reloj en la balanza

Y agregar la sustancia de Agar EosinaY azul de metileno

2.- Pipetear el agua purificada  y medirlo  en la probeta. Encender el mechero. 

       3.-Vaciar el agua en  el Matraz Erlenmeyer, y disolver la sustancia de Agar Eosina y azul de metileno ya pesada.

        4 .-Poner a calentar la olla exprés en donde se meterán los matraces con el agar .

     5-Colocar el mechero debajo del trípode y poner a calentar el Matraz Erlenmeyer  moviéndolo constantemente apoyándose de un agitador de vidrio.

      6-Al comenzar a hervir la sustancia se retira el mechero para evitar que la sustancia se derrame con la ayuda de una tira de papel y meter un rollo de gasa en la boca del matraz Erlenmeyer.

     7.- Llevar la sustancia a la olla exprés para esterilizarla a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos.

     8.-Una vez transcurrido el tiempo se retira la olla exprés del fuego y se enfría para poder sacar los matraces Erlenmeyer.