Práctica:   Agar E.M.B. (Eosina y Azul de Metileno)

Función.

Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram Negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Propósito:

El fin que obtenemos al realizar esta  práctica es reconocer  las bacterias Gram Negativas que se alojan en el medio de cultivo.

Fundamento.

Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine. En el medio de cultivo, la peptona es la fuente nutritiva y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y también, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. El agar es el agente solidificante. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Permite el crecimiento de Candida como colonias rosadas y puntiformes. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Materiales

-          Mechero de Bunsen

-          Balanza

-          Espátula

-          Vidrio de reloj

-          Trípode

-          Tela de asbesto

-          Probeta

-          Pipeta

-          Matraz Erlenmeyer

-          Algodón

-          Olla exprés

          Gasas

-         Agitador

Sustancias

-          Agar eosina y azul de metileno

-          Agua purificada

Procedimiento

1.- Pesar el vidrio de reloj en la balanza

Y agregar la sustancia de Agar EosinaY azul de metileno

2.- Pipetear el agua purificada  y medirlo  en la probeta. Encender el mechero. 

       3.-Vaciar el agua en  el Matraz Erlenmeyer, y disolver la sustancia de Agar Eosina y azul de metileno ya pesada.

        4 .-Poner a calentar la olla exprés en donde se meterán los matraces con el agar .

     5-Colocar el mechero debajo del trípode y poner a calentar el Matraz Erlenmeyer  moviéndolo constantemente apoyándose de un agitador de vidrio.

      6-Al comenzar a hervir la sustancia se retira el mechero para evitar que la sustancia se derrame con la ayuda de una tira de papel y meter un rollo de gasa en la boca del matraz Erlenmeyer.

     7.- Llevar la sustancia a la olla exprés para esterilizarla a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos.

     8.-Una vez transcurrido el tiempo se retira la olla exprés del fuego y se enfría para poder sacar los matraces Erlenmeyer.